PCR反應體系包括什么

PCR是一種選擇性體外快速擴增DNA片段的方法。在體外以類似于細胞內DNA的半保留復制過程，以擬擴增的模板DNA分子，與模板DNA互補的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應體系，經過重復地變性一退火一延伸三步，擴增新的目的DNA鏈，這個過程通過控制反應體系的溫度來實現。那么你知道PCR反應體系包括什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、模板(template)模板即擴增用的DNA，可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質粒DNA等)或RNA(如總RNA、...

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為什么qPCR提RNA不提DNA

定量PCR（qPCR）是一種在PCR反應中實時監測核酸擴增產物的方法。為什么qPCR提RNA不提DNA？RNA更能反映gene的表達水平依據中心法則，細胞內的DNA序列首先被轉錄成RNA分子，特別是信使RNA（mRNA），隨后mRNA攜帶遺傳信息，用于指導蛋白質的合成。mRNA的豐度和多樣性是衡量基因表達水平的關鍵指標，它們直接關聯到特定基因在特定時間和條件下的活性。與蛋白質相比，RNA的水平變化能夠更快地反映基因表達的動態變化，因為RNA的穩定性相對較低，其水平變化可以迅速...

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RNA和WB蛋白的關系是怎樣的？

qRT-PCR（定量逆轉錄聚合酶鏈反應）和Westernblot（蛋白質印跡法）是兩種常用的生物分子檢測技術，它們分別用于檢測mRNA和蛋白質的表達水平。雖然蛋白質是由mRNA翻譯而來，但mRNA的表達水平總是與蛋白質的表達水平一致嗎？做實驗任何一個結果如果你驗證了幾遍都是一樣，那么請不要懷疑自己，也許不是你做錯了，試圖去解釋這種現象!蛋白表達和RNA水平不一致的原因有：轉錄后調控：mRNA在轉錄后可以經歷多種調控過程，如剪接、編輯、降解和穩定性調控。這些過程可以影響mRNA...

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加藥處理的細胞如何換液？

加藥處理的細胞換液，需要遵循一定的操作步驟，確保實驗環境的無菌以及細胞的健康生長。以下是換液的一般步驟：1換液時間：一般建議每24或者48小時換液一次。2準備新的培養基：根據細胞類型和生長需求，選擇合適的培養基。確保培養基新鮮、無菌，并在使用前預熱至37℃。收集舊培養基：輕輕搖晃培養瓶，使舊培養基充分混合。使用移液器將舊培養基收集到廢液缸。注意不要觸碰到細胞表面。3添加新培養基：將收集到的舊培養基丟棄，向培養瓶中加入新的培養基。確保新的培養基充分覆蓋細胞表面，避免氣泡產生，也...

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你知道細胞轉染實驗中轉染效率低的原因嗎？

轉染細胞效率低下的原因在生物醫學研究中，將外源基因導入細胞以研究其功能或使細胞展現出新的特性是非常常見的實驗手段。然而，轉染細胞的效率低下一直是科研人員面臨的一大難題。今天小編將探討轉染細胞效率低下的原因，以期為提高轉染效率提供有益的思路。1.細胞類型和狀態不同的細胞類型具有不同的轉染效率。一些難轉染的細胞，如神經元和肝細胞，通常需要更復雜的轉染技術。此外，細胞的生長狀態也會影響轉染效率，處于對數生長期的細胞更容易接受外源基因。如果是貼壁細胞的話，貼壁率應該在70-80%；如...

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