一文了解Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍(lán)染色法

一、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍(lán)結(jié)構(gòu)

考馬斯亮藍(lán)R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的兩種化學(xué)形式，結(jié)構(gòu)上R-250比G-250少了2個(gè)甲基。命名上“R"為Red的縮寫(xiě)，因R-250的藍(lán)色染料呈微紅色；命名上“G"為Green 的縮寫(xiě)，因G-250的藍(lán)色染料泛淺綠色，也稱為膠體考馬斯亮藍(lán)（見(jiàn)下文）；“250"表示考馬斯亮藍(lán)的純度。

其中R-250因少兩個(gè)甲基，與蛋白質(zhì)反應(yīng)比較緩慢，染色耗時(shí)較長(zhǎng)，但是容易被洗脫下去，所以常用作凝膠電泳中蛋白質(zhì)條帶染色的基礎(chǔ)染料。而G-250因?yàn)槎鄡蓚€(gè)甲基，與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速，且形成有色復(fù)合體較為穩(wěn)定，不容易洗脫，常用于蛋白定量的Bradford 法測(cè)定試劑；也可染膠，但其脫色時(shí)間較長(zhǎng)、脫色困難，背景較高，長(zhǎng)時(shí)間在水中脫色容易使凝膠吸水膨脹甚至破碎。

二、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍(lán)染色蛋白質(zhì)染料要求

用染料和生物大分子結(jié)合形成有色的復(fù)合物是電泳后檢測(cè)的方法。選用染料通常應(yīng)考慮以下要求：
1. 必須與大分子結(jié)合以形成一個(gè)不溶性的，有色的，緊密的復(fù)合物，但不結(jié)合到凝膠中和支持膜上，以便從凝膠中除去，否則高背景會(huì)影響蛋白帶的辨別和定量掃描。
2. 染料必須容易溶解在對(duì)大分子沒(méi)有影響的溶劑中，以利于背景的脫色。
3. 選用高吸光系數(shù)的染料有利于提高定量測(cè)定的靈敏度。
4. 選用能與大分子有專一性結(jié)合的染料，并在結(jié)合后能產(chǎn)生不同的顏色（如熒光)，可以提高檢測(cè)的選擇性和靈敏度。

早期用于蛋白染色的染料是氨基黑10B，是一種含有兩個(gè)磺酸基團(tuán)的酸性重氮化合物，所以能與堿性氨基酸殘基結(jié)合進(jìn)而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)染色。但其對(duì)SDS-蛋白質(zhì)染色效果不好；此外，氨基黑10B對(duì)不同蛋白質(zhì)染色時(shí)，著色度不等、色調(diào)不一(有藍(lán)、黑、棕等)；染色靈敏度低，進(jìn)行凝膠定量掃描時(shí)，誤差較大。 考馬斯亮藍(lán)染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物，每個(gè)分子也含有兩個(gè)磺酸基團(tuán)，也能與堿性氨基酸殘基結(jié)合進(jìn)而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)染色，其次，還可通過(guò)染料的疏水性殘基和蛋白質(zhì)的疏水性區(qū)域的作用產(chǎn)生疏水性力，同時(shí)也存在氧鍵和范德華力的作用。考馬斯亮藍(lán)染色靈敏度比氨基黑高5倍， 并且適用于SDS-PAGE電泳微量蛋白質(zhì)染色，此外與不同蛋白結(jié)合呈現(xiàn)基本相同的顏色，并且在比較寬的范圍內(nèi) ，掃描峰的面積與蛋白量有線性關(guān)系。

三、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍(lán)染色考染的應(yīng)用

考馬斯亮藍(lán)又稱為Bradford法，是一種常用的蛋白定性定量分析方法。其主要利用Coomassie Brilliant Blue G-250這種酸性染料與蛋白質(zhì)在酸性環(huán)境下產(chǎn)生吸附,導(dǎo)致染料的最大吸光波長(zhǎng)從465 nm變?yōu)?/span>595 nm。通過(guò)制備不同濃度的牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品液,與Bradford試劑混合后測(cè)定其595 nm吸光度值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。與標(biāo)準(zhǔn)品同量的樣品蛋白溶液與Bradford試劑混合。5 min后在595 nm波長(zhǎng)下測(cè)定各樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出各樣品的蛋白濃度。

此外，考馬斯亮藍(lán)（Coomassie Brilliant Blue）與麗春紅染色一樣，也是WB實(shí)驗(yàn)中常用的染色方法。通常情況下考馬斯亮藍(lán)用于染SDS-PAGE凝膠以評(píng)估電泳和轉(zhuǎn)膜條件是否合適（在電泳完成后染色可以根據(jù)凝膠上條帶的位置形狀初步判斷蛋白的遷移情況；在電轉(zhuǎn)完成后進(jìn)行該染色可初步判斷蛋白是否有殘留，幫助實(shí)驗(yàn)人員判斷轉(zhuǎn)膜條件是否合適），而麗春紅染色則主要用于染膜以初步評(píng)估轉(zhuǎn)膜效率及不同組間蛋白表達(dá)情況。

四、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍(lán)染色步驟

（1）電泳結(jié)束后，將膠板取出放入加有超純水的平皿中潤(rùn)洗，以去除殘留電泳液。

（2）之后加入考馬斯亮藍(lán)染液浸沒(méi)，放至水平搖床室溫30 min或更長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行染色（具體根據(jù)凝膠厚度和溫度進(jìn)行調(diào)整），直至凝膠與染色液顏色十分接近。

（3）棄去染色液或回收染色液（可回收使用3次左右）。

（4）脫色直至背景清晰。

五、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍(lán)部分產(chǎn)品表

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