Elabscience Caspase 1活性檢測(cè)試劑盒的原理與注意事項(xiàng)

Elabscience®自主研發(fā)的 Caspase 1 Activity Assay Kit 采用分光光度法，可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織裂解液或其它樣本的caspase 1活性。Caspase 1 也稱 interkeukin 1β conberting enzyme (ICE)，是caspase 家族中唯yi可以剪切 IL-1β 前體蛋白或 IL-18 前體產(chǎn)生相應(yīng)成熟的細(xì)胞因子的 caspase。那么你知道Elabscience Caspase 1活性檢測(cè)試劑盒的原理與注意事項(xiàng)嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、檢測(cè)原理

Elabscience Caspase 1活性檢測(cè)試劑盒是基于 caspase 1 可以催化底物Ac-YVAD-pNA 產(chǎn)生黃色的 pNA (p-nitroaniline)，pNA 在 405nm 附近有強(qiáng)吸收，從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè) caspase 1 的活性。

二、保存條件

-20°C 可保存一年。Ac-YVAD-pNA (4 mM)應(yīng)適當(dāng)分裝并避光保存，避免反復(fù)凍融。

三、注意事項(xiàng)

1. 所有待檢樣本都需檢測(cè)蛋白濃度，由于樣本裂解液中含有還原劑，不適合使用 BCA 法進(jìn)行蛋白濃度測(cè)定，推薦使用考馬斯亮藍(lán)法（Bradford 法）。

2. 建議在正式實(shí)驗(yàn)前，選擇2~3個(gè)預(yù)期差異大的樣本進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若樣本吸光值超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)量范圍，則需稀釋樣本或者調(diào)整上樣量再進(jìn)行測(cè)定。

3. 進(jìn)行caspase 1活性測(cè)定的樣本，其蛋白濃度應(yīng)在1~4 mg/mL，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 一次實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞數(shù)目建議不低于 1×106個(gè)，組織樣本不低于50mg，以便達(dá)到1~4 mg/mL的蛋白濃度。否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的精準(zhǔn)度，導(dǎo)致蛋白濃度過(guò)低，反應(yīng)體系內(nèi)活性 caspase 1過(guò)少而OD值偏低。

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