重點推介：Wako蛋白磷酸化丙烯酰胺Phos-tag™ Acrylamide AAL-107

Phos-tag™是一種可特異性捕獲磷酸化Ser、Thr、Tyr等物質的功能分子，由日本廣島大學醫齒藥學綜合研究科醫學品分子機能科學研究室開發。以Phos-tag™ 丙烯酰胺（Phos-tag™ Acrylamide）為首開發的多種Phos-tag™ 產品被應用于世界范圍內的基礎研究，并且在GPCR通路及Wnt通路的信號轉導分析方面也取得了優秀成果。

在制備SDS-PAGE預制膠過程中加入Phos-tag™ Acrylamide，即可根據磷酸化水平和磷酸化位點分離磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白。

原理：

1. 電泳中的磷酸化蛋白捕獲2個二價金屬離子。

2. 磷酸化水平越高電泳速度越慢。

3. 根據磷酸化水平進行分離。（即使磷酸化位點的數目相同，但只要位置不同就能分離）

實驗數據

①α-casein去磷酸化反應隨時間的變化

使用堿性磷酸酶隨時間（孵育時間：0-120 min）處理α-casein，并使用Phos-tag™ SDS-PAGE和常規SDS-PAGE分離去磷酸化處理的樣品。

②野生型/突變型Noxa表達的MCL-1磷酸化水平變化

③二維電泳中的應用：hnRNP K異構體的磷酸化分析

通過免疫沉淀法，從經LPS刺激后的小鼠巨噬細胞J774.1的細胞核提取液中，分離得到hnRNP K。在二維電泳中，一維使用IPG膠（pH 4.7-5.9），二維使用Phos-tag™ SDS-PAGE，分離hnRNP K的異構體（66 kDa，64 kDa）。使用質譜儀可以確認不同的點代表不同的異構體或修飾位點。

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