蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法有哪些？

蛋白質(zhì)含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)可以用于測(cè)定蛋白質(zhì)濃度和檢測(cè)所提取的蛋白質(zhì)含量，那么蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、folin—酚試劑法

這種蛋白質(zhì)測(cè)定法是zui靈敏的方法之一。過(guò)去此法是應(yīng)用zui廣泛的一種方法，由于其試劑的配制較為困難，近年來(lái)逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即folin-酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。folin-酚試劑中的磷鉬酸鹽-磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。

folin-酚試劑法最早由lowry確定了蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的基本步驟。以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。這個(gè)測(cè)定法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點(diǎn)是費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，要精確控制操作時(shí)間，標(biāo)準(zhǔn)曲線也不是嚴(yán)格的直線形式，且專(zhuān)一性較差，干擾物質(zhì)較多。對(duì)雙縮脲反應(yīng)發(fā)生干擾的離子，同樣容易干擾lowry反應(yīng)。而且對(duì)后者的影響還要大得多。酚類(lèi)、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類(lèi)、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素（0.5%），硫酸納（1%），硝酸納（1%），三氯yi酸（0.5%），乙醇（5%），yi醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液對(duì)顯色無(wú)影響，但這些物質(zhì)濃度高時(shí)，必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液，只須加濃碳酸鈉-氫氧化鈉溶液，即可顯色測(cè)定。若樣品酸度較高，顯色后會(huì)色淺，則必須提高碳酸鈉-氫氧化鈉溶液的濃度1～2倍。

二、考馬斯亮藍(lán)法

考馬斯亮藍(lán)顯色法的基本原理是根據(jù)蛋白質(zhì)可與考馬斯亮藍(lán)G-250 定量結(jié)合。當(dāng)考馬斯亮藍(lán) G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合后，其對(duì)可見(jiàn)光的最大吸收峰從 465nm 變?yōu)?595nm。在考馬斯亮藍(lán) G-250 過(guò)量且濃度恒定的情況下，當(dāng)溶液中的蛋白質(zhì)濃度不同時(shí)，就會(huì)有不同量的考馬斯亮藍(lán) G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉(zhuǎn)變成吸收峰為 595nm 的形式，而且這種轉(zhuǎn)變有一定的數(shù)量關(guān)系。一般情況，當(dāng)溶液中的蛋白質(zhì)濃度增加時(shí)，顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加，因此可以用考馬斯亮藍(lán) G-250 顯色法來(lái)測(cè)定溶液中蛋白質(zhì)的含量。

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