RNA提取成功的要點(diǎn)有哪些？

RNA是目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時(shí)是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時(shí)代的重要手段。那么你知道RNA提取成功的要點(diǎn)有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

1. 組織樣本要盡可能的新鮮，避免反復(fù)凍融。

2. 提取時(shí)組織要充分研磨，組織量不宜過(guò)少，更不宜過(guò)多。

3. 加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時(shí)間，使樣本充分裂解。

4. 在用Trizol法提取時(shí)，分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸，不能多吸"，千萬(wàn)不能提取到中間層，否則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的基因組DNA污染。

5. 洗滌時(shí)洗滌液應(yīng)充分浸潤(rùn)到管壁的四周，確保洗滌che底。

6. 柱式提取法，洗滌完后除了對(duì)柱子進(jìn)行空離后，還應(yīng)當(dāng)將吸附柱置于超凈臺(tái)內(nèi)吹風(fēng)5~10 min，使有機(jī)溶劑充分揮發(fā)干。

7. 柱式法最后洗脫時(shí)候，當(dāng)加入DEPC水后還應(yīng)孵育3~5 min，或者提前將DEPC水加熱至60℃，可提高洗脫得率。傳統(tǒng)的Trizol裂解異丙醇沉淀法最后RNA是用DEPC水溶解沉淀，則應(yīng)當(dāng)給予適當(dāng)溶解時(shí)間，并用槍頭不斷吹吸離心管底部。

8. 預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾個(gè)方面：

（1）經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase污染。

（2）使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。

（3）RNA在Trizol試劑中不會(huì)被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過(guò)程中應(yīng)使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150 ℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水che底清洗，再滅菌，即可去除RNase

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