RNA提取的原理是什么？

不同組織RNA提取原理是將細(xì)胞裂解，釋放出 RNA，并通過不同方式去除蛋白，DNA 等雜質(zhì)，最終獲得高純度 RNA 產(chǎn)物的過程。常用的RNA提取方法是Trizol方法，Trizol內(nèi)含異硫氰酸胍能迅速破碎細(xì)胞，同時使核蛋白復(fù)合體中的蛋白變性并釋放出核酸，由于釋放出的DNA和RNA在特定pH值下的溶解度不同，且分別位于中間相和水相，從而使DNA和RNA得到分離，取出水相后，通過有機(jī)溶劑 (氯仿) 抽提及異丙醇沉淀，可得到純凈RNA。那么你知道RNA提取的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！

一、常見RNA提取樣本細(xì)胞裂解方法

1.異硫氰酸胍/苯酚（Trizol）

原理：苯酚裂解細(xì)胞，變性蛋白，但不能wan全抑制RNase活性。異硫氰酸胍迅速溶解蛋白，破碎細(xì)胞，解離核蛋白復(fù)合體，釋放核酸，并抑制RNase活性，保持RNA完整性。苯酚是酸性酚，后續(xù)加入氯仿進(jìn)行有機(jī)萃取。

特點：得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在內(nèi)的總RNA。但產(chǎn)生有機(jī)試劑廢物。

適用范圍：次級代謝較少的植物組織，如幼苗、幼葉等。培養(yǎng)細(xì)胞、動物組織、微生物。

2.胍鹽/β-巰基乙醇法：

原理：胍鹽一般是鹽酸胍或異硫氰酸胍。鹽酸胍迅速裂解細(xì)胞，變性蛋白，并抑制核酸酶活性。配合β-巰基乙醇還原蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的二硫鍵，從而使RNase變性。

特點：得率高

適用范圍：次級代謝較少的植物組織，如幼苗、幼葉等。培養(yǎng)細(xì)胞、動物組織、微生物。

二、常見抽提方法：

1.酚氯仿抽提（有機(jī)試劑抽提）

原理：將被裂解的生物樣本，混勻離心分相以后，RNA在上層水相，DNA，蛋白質(zhì)在中間層，下層有機(jī)相。收集水相加入乙醇或異丙醇可沉淀RNA，漂洗后得到RNA。

優(yōu)點：得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在內(nèi)的總RNA。

缺點：用到苯酚、氯仿等有毒試劑。

2.硅膠柱法抽提

原理：硅基質(zhì)材料在一定的高鹽緩沖系統(tǒng)下高效、專一地吸附核酸。（高鹽低pH吸附核酸，低鹽高pH釋放核酸。

優(yōu)點：操作簡單、安全無毒

缺點：需配合高速離心機(jī)使用；提取的總RNA不含小于200nt的小RNA。

3. 磁珠法抽提

原理：納米微球磁珠材料表面涂上一層二氧化硅，使磁珠獲得吸附能力。

優(yōu)點：磁場中快速分離，無需離心，可實現(xiàn)自動化操作。

缺點：成本較高；提取的RNA可能殘存磁珠。

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