PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的具體操作流程是怎樣的

　　PEI線性轉(zhuǎn)染試劑是由一種陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑，分子量40000，它能與核酸形成復(fù)合物，并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動物細(xì)胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適。該試劑可在含血清與抗生素的*培養(yǎng)基中發(fā)揮作用，即使在有血清存在的情況下，它仍然能高效的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)操作簡單，對大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞都有較高的轉(zhuǎn)染效率(用于常見細(xì)胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等)，并且細(xì)胞毒性較低。

　　PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的操作流程：

　　1、細(xì)胞鋪板

　　提前一天將細(xì)胞種植在六孔板中，以轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度在70%~80%為宜。

　　2、轉(zhuǎn)染過程

　?。?）在轉(zhuǎn)染前2h，移除細(xì)胞上原有的培養(yǎng)基，換為新鮮的*培養(yǎng)基。

　?。?）將2ug質(zhì)粒DNA用50uL無血清稀釋液稀釋，充分混勻制成DNA稀釋液。

　　注意：無血清稀釋液建議采用Opti-MEM或ddH2O

　?。?）向DNA稀釋液中直接加入4uL轉(zhuǎn)染試劑，室溫靜置10~15min。轉(zhuǎn)染復(fù)合物配制完成。

　?。?）將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕柔混勻。

　?。?）繼續(xù)培養(yǎng)24~48h，收取細(xì)胞進(jìn)行鑒定或加入相應(yīng)抗生素篩選穩(wěn)定克隆。

　?。?）使用本產(chǎn)品轉(zhuǎn)染后一般在24h開始進(jìn)入表達(dá)高峰期，36~48h達(dá)到表達(dá)高峰，相對于脂

　　質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劉，達(dá)到峰值的時間延后約6~12h。

　　PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的注意事項(xiàng)：

　　1）本產(chǎn)品對細(xì)胞非常溫和，一般情況下轉(zhuǎn)染后無需進(jìn)行換液操作。

　　2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。